分享Waters液相色譜柱的選擇方法和條件！
更新時間：2022-06-28 點擊次數(shù)：1801次
Waters液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品，與C8或C18柱相比，疏水性較小，通?？墒褂盟喑煞指叩南疵撘?。對非極性化合物表現(xiàn)了更短的保留時間，對極性化合物幾乎沒有明顯影響。它是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據(jù)不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對混合物進(jìn)行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜。
目前本產(chǎn)品的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
Waters液相色譜柱選擇的方法和條件：
1、填料基質(zhì)：
a、硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
b、聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定，機械強度小。
2、顆粒外形：大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時；不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
3、顆粒粒徑：粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時會導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品，UPLC可以使用1.5μm的填料；另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
4、含碳量：含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品；低含碳量分析時間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
5、孔徑和比表面積：HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念。孔徑小比表面積大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存，上樣量和復(fù)雜成分的分離度；比表面積小，平衡時間快，適合梯度分析。
6、孔容和機械強度：孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機械強度?？左w積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
7、封端封端：封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。
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