不同類型的Agilent液相色譜柱應(yīng)該如何清洗？
更新時(shí)間：2020-07-23 點(diǎn)擊次數(shù)：1786次
Agilent液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品，與C8或C18柱相比，疏水性較小，通常可使用水相成分高的洗脫液。對(duì)非極性化合物表現(xiàn)了更短的保留時(shí)間，對(duì)極性化合物幾乎沒(méi)有明顯影響。Agilent液相色譜柱是以液體作為流動(dòng)相的一種色譜分析法，它亦是根據(jù)不同組分在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來(lái)對(duì)混合物進(jìn)行分離的。氣相色譜中評(píng)價(jià)色譜柱柱效的方法及計(jì)算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜。那么該色譜柱應(yīng)該如何進(jìn)行清洗呢？下面我們一起來(lái)看看。
1、離子交換柱：長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
2、正相柱：分別用正己烷（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)），甲醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積（異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過(guò)高）注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
3、反相柱：常用方法：分別用甲醇：水=90:10，純甲醇（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來(lái)，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷。在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
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